正就读中学的少年迈尔斯（沙梅克·摩尔 Shameik Moore 配音）意外被一只遭受放射性污染的蜘蛛咬伤，随后身体发生奇特的变化。偶然机缘，他目睹了蜘蛛侠（克里斯·派恩 Chris Pine 配音）和犯罪头目金并（列维·施瑞博尔 Liev Schreiber 配音）的战斗。为了阻止金并利用时空对撞机扰乱宇宙，蜘蛛侠最终壮烈牺牲。可未过多久，来自平行宇宙的颓废的彼德·帕克（杰克·约翰逊 Jake M. Johnson 配音）出现在迈尔斯面前。为了阻止金并的阴谋，并帮助这个帕克返回自己的宇宙，他们闯入金并的老巢。在这一过程中，二人遭到章鱼博士和徘徊者的狙击。与此同时，来自其他宇宙的女蜘蛛侠、暗影蜘蛛侠、蜘猪侠、二次元蜘蛛妹相继出现。
他们合力与恶势力展开斗争……
安志杰,吴建豪,洪天照,赵仁杰,李元玲,赵夕汐,李彦萱,张鹤伦
高石明里,黑羽麻璃央,三元雅芸
段奕宏,梁朝伟,夏侯云姗,张傲月,欧嘉·柯瑞兰寇,奥利维尔·雷堡汀,何塞·加西亚,成晓星,张志坚,奚美娟,白志迪,巫刚,任正斌,富扬恩
阿列克斯·涅夫斯基,罗芙洛,马蒂亚斯·休斯,唐龙·威尔逊,乔恩·马克,伊琳娜·安东年科,詹姆斯·查尔克
Mark Prin Suparat
王轩,李星瑶,卢星月,石毅,张俊杰,高明